荧光定量PCR仪的工作原理是基于聚合酶链反应技术和荧光探针技术相结合的一种检测方法。它通过实时监测荧光信号的变化,实现对目标DNA片段的定量分析。
荧光定量PCR仪的核心部分是荧光探针。荧光探针是一种能够特异性地与目标DNA序列结合的短片段核酸,其两端分别标记有荧光基团和猝灭基团。当荧光探针与目标DNA结合时,荧光基团发出的荧光被猝灭基团吸收,使得荧光信号减弱。
通过实时监测荧光信号的变化,将荧光信号强度与PCR循环次数相对应,从而绘制出荧光信号曲线。在PCR反应初期,荧光信号较弱;随着反应的进行,荧光信号逐渐增强;当达到一定循环次数时,荧光信号趋于稳定。通过分析荧光信号曲线,可以确定目标DNA片段的数量。
荧光定量PCR仪的主要优点有以下几点:
1、实时性:与传统的终点法PCR相比,它可以在反应过程中实时监测荧光信号的变化,无需等待反应结束后再进行分析。
2、高灵敏度:由于荧光探针具有高度特异性,可以检测到非常低浓度的目标DNA片段。
3、高准确性:通过实时监测荧光信号的变化,可以精确地计算出目标DNA片段的数量,避免了传统终点法PCR中的误差累积。
4、高通量:还可以同时对多个样本进行分析,大大提高了检测效率。
5、操作简便:操作过程相对简单,只需设置好相应的参数即可自动完成实验。
总之,荧光定量PCR仪通过结合PCR技术和荧光探针技术,实现了对目标DNA片段的实时、高灵敏度、高准确性的定量分析,广泛应用于生物医学研究、病原体检测、基因表达分析等领域。